Monthly Archive: October 2016

胆红素注入1h后,15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组达到血浆总胆红素浓度95%的置信区间分别为:(106 31

胆红素注入1h后,15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组达到血浆总胆红素浓度95%的置信区间分别为:(106.31,123.49)μmol/L、(196.58,238.90)μmol/L和(325.15,349.07)μmol/L,且注入剂量和血浆总胆红素浓度有等级相关性(r=0.9452)。2.LPS可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达(P<0.01)。2h时对p-ERK促进作用最强,5h减弱,24h消失;2h时对IκBα抑制作用最强,5h减弱,24h仍然存在。3.低浓度胆红素单独作用可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达(P<0.01)。当胆红素浓度在(106.31,123.49)μmol/L范围时,可促进p-ERK表达,2h促进作用最强,5h减弱,24h消失;低浓度胆红素可抑制脾细胞IκBα表达,2h抑制作用较5h明显(P<0.01),24h仍存在,该浓度范围的胆红素单独作用对p-ERK、IκBα表达影响均低于LPS的作用(P<0.01)。4.不同剂量胆红素组在LPS激活后p-ERK的表达情况:胆红素浓度在(106.31,349.07)μmol/L范围时,对LPS激活p-ERK表达均有协同作用;各时段与同时段的LPS组比较,差异有统计学意义(P<0.01),并随着胆红素浓度升高,协同作用越明显,表达增多,随着时间延长,体内胆红素的代谢,激活作用减弱,24h时作用已消失。5.不同剂量胆红素组在LPS激活后IκBα的表达情况:①在给予LPS激活后,胆红素浓度在(106.31,349.07)μmol/L范围时对LPS抑制IκBα的表达均有协同作用,2h时协同作用最强(P<0.01);随着胆红素浓度升高,IκBα表达量减少;随着胆红素代谢,IκBα表达量增加,24h时作用仍存在。6.p-ERK和IκBα与胆红素浓度的直线相关分析结果:⑴在2、5h时p-ERK与胆红素浓度水平呈正相关(r分别为0.9428、0.9945,P<0.01)。在24h时两者无相关关系存在(r=-0.1809,P>0.05)。⑵在2、5h时IκBα与胆红素浓度水平呈负相关性(r分别为-0.9391、-0.969, 无 更多 P<0.01)。在24h时两者无相关关系存在(r=-0.098,P>0.05)。7.p-ERK和IκBα相关性分析:在2h、5h时p-ERK和IκBα(SUM)值呈负相关(r分别为-0.9763、-0.9687, P<0.01,在24h时两者无相关关系存在(r=-0.185, P>0.05)。结论:1.LPS单独作用能够促进p-ERK的表达和抑制IκBα表达;2.低浓度胆红素单独作用能够促进p-ERK表达和抑制IκBα表达;3.低、中、高浓度胆红素对LPS刺激p-ERK表达有协同作用,这种协同作用呈浓度依赖性,随着胆红素浓度的升高,协同作用增强,随着胆红素代谢,刺激作用减弱;4.低、中、高浓度胆红素对LPS抑制IκBα表达有协同作用,这种协同作用呈浓度依赖性,随着胆红素浓度的升高,协同作用越强,随着胆红素代谢,协同作用减弱。提示胆红素影响免疫细胞的机制可能与调节TLR4信号通路中p-ERK的磷酸化和IκBα表达减少有关。目的研究高血糖SD大鼠局灶性脑缺血再灌注后P38MAPKα和β在脑组织中的磷酸化状态,以及在各细胞中的表达和时空规律,以此探讨P38MAPK在高血糖加重脑缺血损伤中的作用。 方法通过腹腔注射STZ制备1型糖尿病模型,线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血30min/再灌注模型。然后通过HE染色,对比观察糖尿病高血糖局灶脑缺血/再灌注组(高血糖组)和正常血糖局灶脑缺血/再灌注组(正常血糖组)脑组织的病理学变化,神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况,采用免疫组化法、免疫荧光染色法和Western Blotting法检测磷酸化P38MAPKα和β(p-p38α,p-p38β)的表达。 结果(1)大鼠局灶脑缺血/再灌注术后,大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损,高血糖缺血再灌注组的脑功能评分明显较正常血糖手术组升高(P目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides, CART)抗氧化减轻缺血性脑损伤及其机制。 方法:健康雄性ICR小鼠随机分为四组:缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)组、CART组、生理盐水(Normal Saline, NS)组、假手术组。插线法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, 所以 MCAO)模型,CART组和NS组于缺血2小时再灌注前分别经尾静脉注射给予CART55-102和同体积NS,然后每隔24小时重复给药1次。再灌注不同时间点分别以TTC染色检测脑梗死体积,干/湿法测定脑组织含水率,酶联免疫吸附法检测梗死侧大脑皮质4-羟壬烯醛(HNE)、8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)含量;采用流式细胞技术检测梗死侧大脑皮质氧自由基(ROS)含量和线粒体膜电位;采用比色法检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性;实时聚合酶链式反应(RT-PCR)测定梗死侧大脑皮质线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA) mRNA表达。 结果:(1)与I/R组和NS组比较,CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均不同程度减小,再灌注24h、48h、72h其差异均有统计学意义(均P

Ox-LDL诱导BMSCs增殖和迁移,上调Akt2、MMP-2表达,下调Akt1、eNOS表达;LOX-1单抗或let-7g类似物

Ox-LDL诱导BMSCs增殖和迁移,上调Akt2、MMP-2表达,下调Akt1、eNOS表达;LOX-1单抗或let-7g类似物能抑制ox-LDL诱导的BMSCs增殖和迁移。 结论: 1、Ox-LDL能被小鼠BMSCs吞噬,诱导MSCs增殖和迁移,对MSCs凋亡无明显影响; 2. Ox-LDL诱导的小鼠BMSCs增殖和迁移与let-7g/LOX-1-Akt2信号通路相关 第一部分小鼠BMSCs体外扩增及ox-LDL对BMSCs凋亡的影响 目的:体外分离培养小鼠BMSCs,探讨ox-LDL对其凋亡的影响。 www.selleckchem.cn/products/Sunitinib-Malate-(Sutent).html 方法:采用密度梯度离心法+贴壁培养法分离扩增小鼠BMSCs,采用MTT方法测定MSCs的生长曲线,应用流式细胞仪测定细胞表面抗原表达,成脂诱导分化鉴定BMSCs分化能力。Annexin-V/PI及TUNEL检测ox-LDL对MSCs凋亡的影响。 结果:刚分离的小鼠骨髓细胞呈圆形,经多次换液、传代后去除悬浮细胞,可见MSCs贴壁生长,第三代细胞行流式细胞术检测表面抗原,显示CD29阳性,而CD31、CD34、CD45阴性,成脂分化示MSCs能分化为脂肪细胞。Annexin-V/PI细胞凋亡检测示不同浓度ox-LDL(0、10、20、40μg/mL)干预24h后MSCs凋亡率分别为2.0±0.9%、3.2±1.2%、3.9±1.8%、4.3±2.2%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);20μg/mL的ox-LDL干预0、6、12、24h后MSCs凋亡率分别为2.3±0.8%、3.4±1.2%、4.2±1.6%、3.9±1.4%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);TUNEL细胞凋亡检测示不同浓度ox-LDL(0.10、20、40μg/mL)干预24h后MSCs凋亡率分别为2.1±1.0%、2.9±1.2%、4.0±0.9%、3.7±1.3%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);20μg/mL的ox-LDL干预0、6、12、24h后MSCs凋亡率分别为2.5±0.7%、3.7±1.3%、4.2±1.2%、4.0±1.0%,凋亡率差异无显著性(P>0.05)。 结论:本课题采用密度梯度离心法+贴壁培养法成功地分离和体外扩增出较为均一的BMSCs。短时间低至中浓度的ox-LDL对MSCs凋亡无明显影响。 第二部分Let-7g/LOX-1介导MSCs吞噬ox-LDL 目的:观察小鼠BMSCs对ox-LDL的吞噬及微小RNA let-7g和膜受体LOX-1在其中的作用。 方法:采用ELISA方法检测MSCs是否能吞噬ox-LDL,实时定量PCR和/或检测western blot检测ox-LDL干预后let-7g和LOX-1表达水平的变化;分别采用LOX-1特异性拮抗剂LOX-1单抗以及let-7g类似物预处理细胞,检测MSCs对ox-LDL吞噬作用的改变程度。 结果:20μg/mL ox-LDL干预MSCs24h后细胞内ox-LDL浓度显著升高,为无ox-LDL干预对照组的6.0±0.8倍,P

1%和62 2%。加入p38MAPK的抑制剂,即为SB203580后明显抑制了SDF-1α诱导的Rac-1和Rac-2蛋白表达。结

1%和62.2%。加入p38MAPK的抑制剂,即为SB203580后明显抑制了SDF-1α诱导的Rac-1和Rac-2蛋白表达。结论:(1)调控Rac表达的最佳SDF-1α浓度为200ng/ml,最佳时间点为12小时;(2)SDF-1α调控Rac的表达是CXCR4和p38MAPK依赖的。 结论 1. hEPCs在SDF-1α诱导下(分1h、2h、6h、12h、24h五个时间点)极性发生了变化,无论在细胞形态还是细胞受体的极化均发生改变,同时hEPCs的细胞群向SDF-1α方向发生了定向迁移。 2.在200ng/ml SDF-1α作用下,Rac蛋白在的亚型racl和rac2其mRNA和蛋白都是在12小时表达量最高。加入CXCR4的抑制剂AMD3100, Rac1和Rac2蛋白表达明显减少;加入p38MAPK的抑制剂SB203580后Rac-1和Rac-2的表达亦明显减少,说明SDF-1α上调Rac表达,是CXCR4和p38MAPK信号通路依赖的。 潜在价值和创新点 1.建立了体外培养hEPCs的细胞培养体系; 2.通过Zigmond chamber的观察证明,脐血来源的hEPCs向SDF-1α方向运动; 3.体外调控Rac表达的最佳SDF-1α浓度为200ng/ml,最佳时间点为12小时;4. SDF-1α上调Rac表达,是CXCR4和P38MAPK信号通路依赖的。研究背景 颈椎板切除术已被广泛应用于治疗儿童脊髓损伤、脊髓肿瘤、先天性畸形以及脊髓空洞症等疾病的治疗。然而,椎板切除手术后可能会发生脊柱的后凸畸形并最终导致神经功能障碍,严重影响人类身体健康。因此,深入探讨椎板切术后颈椎后凸畸形的发病机制有着重要科学意义。 在正常情况下,脊柱矢状面的轴向垂线应当通过颈1(C1)和胸1(T1)中心,颈椎前凸使矢状面的轴向垂线在C2-C7的后方。颈椎生理前凸的维持主要依靠颈椎前方、后方骨和软组织结构的完整及力量的均衡。颈椎前方的骨性结构和椎间盘等组织主要承受压力,后方的关节突关节、韧带和肌肉等组织则主要抵抗颈部张力。先前研究表明:椎板切除术后颈椎后凸畸形的发生是由于颈椎后伸力矩的破坏所造成的。颈椎板切除术后颈椎后方的肌肉韧带结构复合体以及骨性结构的完整性遭到了破坏,使得术前后方韧带所承载的牵张力负荷(后伸力矩)丢失,从而引起前方椎体所承载的压力性负荷增加并最终导致畸的形发生。Pal和Sherk等人对颈椎生物力学研究发现64%的轴向性负荷经由两侧的关节突关节均匀承载,颈椎椎板切除术后这个轴向性负荷将向前转移,估计将增加前方椎体10倍于原来的压力性负荷。因青少年椎体生长板正处在生长发育期,椎板切除术后异常压力的增加使得生长板软骨细胞发育迟滞、凋亡加速,出现椎体楔形变从而形成后凸畸形。 而且 通常 软骨终板在维系脊柱的生物力学结构完整性以及椎间盘营养方面起重要作用。近年来,异常应力下生长板软骨细胞凋亡与颈椎后凸畸形的关系逐渐受到重视,对于生长板软骨细胞凋亡是否参与了椎板切除术后颈椎后凸畸形的发生过程目前尚未有研究报道。此外,异常应力通过何种信号通路诱导软骨细胞凋亡亦未被完全阐明。对于这些问题的回答,需要我们做出进一步的深入研究。 目的: 1.建立椎板切除术后青少年颈椎后凸畸形的动物模型,为研究后凸畸形提供有效的研究载体。 2.通过对体外培养的生长板软骨细胞凋亡机制的研究,以期从分子生物学角度解释椎板切除术后青少年颈椎后凸畸形的发病机制。 方法: 1.24只3月龄大山羊随机分成两组:椎板切除术组(n=12),和对照组(n=12)。分别于手术前、手术后当天以及手术后3、6个月在麻醉下拍摄标准颈椎侧位片,并采用后切线夹角法来评估颈椎曲度的变化。通过透射电镜法以及末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d-UTP缺口末端标记技术(TUNEL)来验证软骨终板的细胞凋亡。 2.取体重100-150g SD大鼠的颈椎体生长板软骨进行原代软骨细胞的分离及培养,通过软骨细胞形态以及二型胶原免疫荧光染色等方法鉴定软骨细胞。分别给予第二代软骨细胞施加0、0.1、0.2、0.5MPa持续静态压力,倒置相差显微镜观察软骨细胞形态变化,CCK-8法检测软骨细胞存活率,流式细胞仪以及TUNEL法检测软骨细胞凋亡率,Western blot法检测MAPK以及线粒体凋亡相关蛋白表达情况。 结果: 1.体内实验部分: (1)影像学结果: 术前两组山羊颈椎曲度之间无明显统计学差异,通过术后与术前X光片比较发现三个月后椎板切除手术组山羊开始发生后凸畸形,在第六个月时后凸畸形进一步加重,而对照组山羊颈椎曲度在整个实验时间内并未发生明显变化。术前手术组山羊C2-C5平均后切线夹角为-15.8±0.8。,术后三个月降低为19.1±1.1。而到第六个月的时候则为20.2±0.6。。手术后与手术前后切线夹角的变化揭示了后凸畸形的形成。 SCH 900776 (2)软骨细胞凋亡: 在整个观察时间点内对照组生长板仅有少量的凋亡细胞。然而,椎板切除手术组在手术后第三个月即可以观察到大量凋亡的软骨细胞(29.7±3.4%),并且凋亡软骨细胞比例在第六个月时进一步增加(35.6±5.4%),手术组软骨细胞凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义。 (3)透射电镜观察: 对照组生长板软骨细胞呈不规则形或椭圆形,细胞膜完整,细胞器丰富,染色质均匀分布。椎板切除术组可见典型的凋亡的软骨细胞,表现为细胞膜皱缩,细胞核碎裂,染色质浓缩以及细胞器的减少。 2.体外实验部分: 1.持续静态压力对终板软骨细胞活力影响: 为研究持续静态压力对生长板软骨细胞存活率的影响,我们分别给予软骨细胞施加不同静态压力(0,0.1,0.2和0.5MPa)加压1,6,12,24,36,和48小时后采用CCK-8法检测细胞存活率。结果显示软骨细胞存活率呈压力以及时间依赖性降低,其中在0.5Mpa大气压下作用24小时细胞存活率约为50%。 2.持续静态压力可以诱导生长板软骨细胞凋亡:…
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KIf-4蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响:1)过表达Klf-4能够使骨肉瘤细胞阻滞在G0/G1期;2)过表达Klf-4能够增

KIf-4蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响:1)过表达Klf-4能够使骨肉瘤细胞阻滞在G0/G1期;2)过表达Klf-4能够增加骨肉瘤细胞G0/G1期周期相关蛋白p21和p27的表达;3)Klf-4过表达可明显抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。4.Klf-4蛋白对骨肉瘤细胞化疗敏感性的影响:1)过表达Klf-4蛋白能够降低化疗药物(阿霉素ADR和顺铂CDDP)对骨肉瘤细胞的增殖抑制能力;2)过表达Klf-4能够抵抗化疗药物引起的凋亡诱导作用;3)沉默Klf-4能够增强骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性;4)Klf-4蛋白表达的高低并不影响多药耐药基因ABCB1和ABCC1的表达,沉默Klf-4能够选择性地降低耐药相关的肿瘤干细胞标记物ABCG2的转录水平。5.Klf-4蛋白对骨肉瘤细胞转移能力的影响:1)过表达Klf-4能够引起骨肉瘤细胞发生间质样变化;2)过表达Klf-4能够上调骨肉瘤细胞间质样蛋白标记物FN. Vinmetin的表达水平;3)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞划痕修复能力;4)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞的运动迁移能力;5)沉默Klf-4蛋白能够抑制骨肉瘤细胞的划痕修复能力及细胞迁移运动能力;6)过表达Klf-4能够引起骨肉瘤细胞肺转移相关标记物CXCR-4的mRNA和蛋白水平上调,沉默Klf-4能够降低CXCR-4的mRNA和蛋白水平。6. 没有 p38MAPK信号通路对Klf-4调控的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响:1)过表达Klf-4能够激活p38 MAPK信号通路;2)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞内p38的磷酸化水平,反之,沉默Klf-4则降低p-p38的表达水平;3)应用p38抑制剂或siRNA干扰p38蛋白表达,可减弱骨肉瘤细胞内Klf-4过表达所引起的sphere形成能力;4)p38抑制剂可以显著抑制Klf-4促进的骨肉瘤细胞转移能力。四.研究结论:Klf-4蛋白是维持骨肉瘤肿瘤干细胞特性所必须的,其表达水平与骨肉瘤的转移、耐药密切相关,而p38 MAPK信号通路则参与调控了Klf-4介导的骨肉瘤肿瘤干细胞特性。第三部分辛伐他汀通过抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性一.研究目的:第一、二部分的研究结果显示,阿霉素增强骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力作用是通过上调Klf-4蛋白实现的,进一步地我们发现Klf-4蛋白的表达具有维持和促进骨肉瘤肿瘤干细胞特性的作用,因此,寻找以Klf-4蛋白为作用靶点的药物或抑制剂,将有助于实现抑制骨肉瘤肿瘤干细胞特性和有效提高阿霉素的临床疗效。然而目前市场上并没有针对Klf-4的特异性抑制剂或药物,基于此,本课题旨在寻找可以抑制Klf-4蛋白的药物来拮抗阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力,为临床靶向治疗骨肉瘤提供新策略。二.研究方法:慢病毒转染细胞构建目的基因过表达模型,Western Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达;流式细胞术检测干细胞标记物CD133的表达;肿瘤微球形成实验考察细胞的自我更新能力;细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力;裸小鼠移植瘤实验检测细胞成瘤能力;免疫组化检测肿瘤组织样本中的目标蛋白表达。三.研究结果1.他汀类药物可抑制Klf-4蛋白进而影响骨肉瘤sphere形成能力:1)多个他汀类药物均能浓度依赖性的降低Klf-4蛋白的表达,其中辛伐他汀的作用最强;2)他汀类药物可以明显减少过表达Klf-4所促进的骨肉瘤sphere形成能力。2.辛伐他汀可以拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性:1)辛伐他汀能够明显抑制ADR促进的干细胞标记物CD133表达比例;2)辛伐他汀能够显著减少ADR促进的肿瘤干细胞标记物CD133、ALDHA1和ABCG2的转录;3)辛伐他汀能够显著减少ADR促进的sphere形成数目增加。3.辛伐他汀可以拮抗ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力:1)辛伐他汀能够明显抑制ADR增强的骨肉瘤细胞划痕修复能力;2)辛伐他汀能够显著抑制ADR引起的骨肉瘤细胞迁移运动能力增强。4.辛伐他汀通过抑制Klf-4拮抗ADR所促进的骨肉瘤细胞成瘤性:1)较高细胞密度(10×104/只)接种时,ADR给药组与生理盐水组的成瘤率均为100%,但ADR给药组平均成瘤体积大于生理盐水组;ADR合用辛伐他汀给药组的成瘤率(50%)明显低于ADR给药组,且平均瘤体积小于ADR给药组;2)较低细胞密度(2×104/只)接种时,与生理盐水组10%的成瘤率相比,ADR给药组的成瘤率明显提高(70%),ADR合用辛伐他汀给药组的成瘤率则明显低于ADR给药组,仅为20%;3)ADR给药组的肿瘤样本中Klf-4的表达水平高于生理盐水组,ADR合用辛伐他汀给药组的Klf-4表达水平则明显低于ADR给药组;4)ADR给药组的肿瘤样本中Klf-4和CD133的荧光表达水平高于生理盐水组,ADR合用辛伐他汀给药组的Klf-4和CD133的荧光表达水平则明显低于ADR给药组。四.研究结论:本研究发现了以辛伐他汀为代表的他汀类药物可以通过抑制Klf-4蛋白表达而有效地拮抗了阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力,提示临床阿霉素用药联合辛伐他汀为代表的他汀类药物可以更加有效地发挥抗骨肉瘤作用。恶性肿瘤是严重威胁人类健康的的主要疾病之一,全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症。目前,大多数的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效,但仍然存在着副作用大、价格昂贵等诸多劣势。因此,寻找新型、高效、低毒的抗肿瘤药物是我们面临的巨大挑战。我国的传统医学在治疗肿瘤方面有着悠久的历史,中草药中含有多种具有很强抗肿瘤作用的植物单体,如何将其分离提取出来并进行合理的开发利用,成为了世界医学面临的重要课题。现代药理学研究证明,中药牛蒡子具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。其主要有效成分牛蒡苷(Arctiin,ARC)在人体内生物利用度低,需经肠道微生物酶解转化为牛蒡苷元(Arctigenin,ARG)方能吸收入血液,发挥药效。目前,药学研究用ARG多为实验室自制,其制备方法都或多或少存在着一些不足之处,如提取效率低、步骤繁杂、对实验室设备要求高等。本研究采用微生物发酵法和硅胶柱层析法从牛蒡子粉中分离纯化ARG,成功建立了一种简便高效的提取方法。此外,据相关报道,ARG可以抑制多种恶性肿瘤细胞的生长,但对于其抗肿瘤作用的分子机制却知之甚少。本研究选取人肝细胞癌作为研究对象,对ARG体内外抗肿瘤机制进行了深入探讨。ARG的制备:本研究采用微生物发酵法,筛选出泡盛曲霉变种和里氏木霉作为发酵菌种,利用两株霉菌所产生的生物酶对牛蒡子粉进行炮制,将牛蒡子粉中的牛蒡苷转化为牛蒡苷元。并且通过对发酵过程中碳源、氮源、发酵时间、p 寻找更多 可能 H、装液量、接种量、发酵底物固液比、碳氮比等诸多因素进行优化,制定出一套牛蒡子粉最佳发酵工艺,可使牛蒡苷转化率达97.8%,产物溶出率达95.7%,损失率低至4.

应用Western Blot技术检测人卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3、HO8910和HO8910/PM中IL-1

应用Western Blot技术检测人卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3、SKOV3、HO8910和HO8910/PM中IL-17RA的蛋白表达水平,为后续研究提供实验依据。2.应用MTT技术检测不同浓度外源性rh selleck合成 IL-17A对五种人卵巢癌细胞系和小鼠上皮性卵巢癌细胞系ID8增殖水平的影响,应用实时荧光定量PCR和Western Blot技术分析癌干细胞标记分子的m RNA和蛋白表达水平。3.应用细胞划痕实验检测外源性rm IL-17A对小鼠卵巢癌细胞系ID8迁移活性的影响。应用8.0μm Transwell小室侵袭实验检测外源性rm IL-17A和/或小鼠原代网膜脂肪细胞对ID8细胞侵袭能力的影响。应用3.0μm Transwell小室进行ID8与小鼠原代网膜脂肪细胞共同培养,应用Western Blot技术分析外源性rm IL-17A和/或网膜脂肪细胞对ID8细胞MMP-2和FABP4的蛋白表达水平的影响。应用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测外源性IL-17A对相关信号分子STAT3和NF-κB的表达水平及磷酸化水平的影响。4.利用C57 BL/6遗传背景的野生型(WT)和IL-17-/-小鼠,建立小鼠腹腔种植瘤和卵巢原位种植瘤两种卵巢癌动物模型,观察内源性IL-17对腹腔内成瘤、原位成瘤和转移的影响,应用免疫组化技术观察瘤组织中IL-17A、MMP-2和FABP4的表达。5.收集不同FIGO分期的卵巢癌临床标本,分析IL-17A、MMP2、FABP4表达与肿瘤临床进展、转移、预后的相关性。6.应用MTT技术检测人卵巢癌细胞系A2780、OVCAR3和SKOV3对顺铂(DDP)的敏感性,分析外源性rh IL-17A对其顺铂敏感性的影响。选择顺铂敏感细胞系A2780和顺铂耐药细胞系OVCAR3为研究对象,应用流式细胞术分析外源性rh IL-17A对细胞经顺铂作用后细胞凋亡水平和细胞周期分布的变化。7.应用实时荧光定量RT-PCR技术检测耐药相关基因ABCG2和TUBB3的m RNA表达水平,应用Western Blot技术检测ABCG2的蛋白表达水平。8.利用C57 BL/6遗传背景的WT和IL-17-/-小鼠,建立小鼠腹腔种植瘤卵巢癌动物模型,观察内源性IL-17对DDP治疗敏感性的影响。9.收集原发性和复发性上皮性卵巢癌临床病理标本,应用免疫组化技术分析IL-17A和ABCG2与卵巢癌临床分期、预后的相关性。结果:1.人卵巢癌细胞系可组成性表达IL-17RA。2.外源性rh IL-17A不影响卵巢癌细胞的增殖水平。0.1ng/m L和100ng/m L rh IL-17A可显著促进A2780、OVCAR3和SKOV3细胞癌干细胞标记分子Oct3/4的m RNA表达水平;但对其Oct3/4的蛋白表达水平无显著作用。3.小鼠上皮性卵巢癌细胞系ID8和小鼠网膜原代脂肪细胞可组成性表达IL-17RA。外源性rm IL-17A可促进ID8细胞的迁移活性,且呈剂量依赖性。外源性rm SB203580小白鼠 IL-17A可直接促进ID8细胞的侵袭能力;IL-17-/-小鼠和WT小鼠的网膜原代脂肪细胞对ID8细胞的侵袭能力均有促进作用,但WT小鼠脂肪细胞的促侵袭活性明显强于IL-17-/-小鼠;加入外源性rm selleck产品 IL-17A后,可进一步增强WT小鼠脂肪细胞对ID8细胞侵袭能力的活性作用;上述作用与IL-17A促进ID8细胞FABP4的蛋白表达水平密切相关,FABP4抑制剂BMS 309403可抑制IL-17A的促侵袭能力。1ng/m L IL-17A作用卵巢癌细胞3h和6h后,可显著促进STAT3 705位点Tyr的磷酸化水平;经STAT3抑制剂HO-3867作用2h后,可显著抑制IL-17A对STAT3信号通路的激活作用,抑制IL-17A对ID8细胞FABP4的蛋白表达水平的上调作用,表明IL-17A主要经STAT3信号通路上调FABP4的表达。4.内源性IL-17可显著减少腹腔种植瘤小鼠的生存时间,促进卵巢癌腹腔内成瘤和原位成瘤。WT小鼠肿瘤组织中IL-17A+细胞呈强阳性表达,未观察到IL-17-/-小鼠肿瘤组织中IL-17A+细胞的表达;WT小鼠肿瘤组织中MMP-2和FABP4均呈强阳性表达,IL-17-/-小鼠肿瘤组织中MMP-2和FABP4呈弱阳性表达。5.临床标本分析表明,IL-17A、FABP4、MMP-2的表达强弱与卵巢癌FIGO分期、淋巴结转移、腹水转移等呈正相关;IL-17A与FABP4、MMP-2的表达水平具有正相关性,进一步证实IL-17A可上调FABP4等转移相关因子的表达。6.A2780、OVCAR3和SKOV3对DDP的敏感性存在差异,A2780为DDP敏感细胞系,OVCAR3和SKOV3为DDP耐药细胞系。与对照组相比,低浓度和高浓度rh IL-17A均显著降低DDP对A2780、OVCAR3细胞的增殖抑制率,仅高浓度rh IL-17A可降低DDP对SKOV3细胞的增殖抑制率。与对照组相比,0.1ng/m L rh IL-17A对A2780和OVCAR3细胞的凋亡水平无明显影响;经0.1ng/m L…
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0%)高于在正常肺组织中的表达水平(阳性率0 0%,P0 05)。结论 Hsp90AB1在NSCLC组织中高表达,并且其表达水平与

0%)高于在正常肺组织中的表达水平(阳性率0.0%,P0.05)。结论 Hsp90AB1在NSCLC组织中高表达,并且其表达水平与肺癌的病理类型及肺腺癌患者总生存期相关。目的研究人前列腺癌组织中热休克蛋白90(HSP90)、糖蛋白96(gp96)的表达及其临床意义。方法收集我院2010年4月至2014年4月间确诊的前列腺癌组织标本56例(其中新鲜组织16例),同期入院的良性前列腺增生组织标本25例(其中新鲜组织8例)作为对照组。同时收集每例患者完整的临床病理资料。运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(IHC)方法分别检测前列腺癌和前列腺增生组织中HSP90、gp96在mRNA和蛋白水平的表达情况及其与患者临床病理资料之间的相关性。结果前列腺癌组织中HSP90、gp96在mRNA水平(P

本研究首次证明舒脉胶囊对心肌缺血(MI)大鼠具有显著的促血管新生疗效,改善MI大鼠心功能。表现为微血管密度(小动脉、小静脉)的增加

本研究首次证明舒脉胶囊对心肌缺血(MI)大鼠具有显著的促血管新生疗效,改善MI大鼠心功能。表现为微血管密度(小动脉、小静脉)的增加,心功能指标LVEF的提高,LVESD、LVEDD降低。且舒脉胶囊的疗效具有剂量依赖性。证实了舒脉胶囊通过对缺血心肌促血管新生作用达到了改善心功能的终极目标。 2.与MIR组比较,舒脉胶囊单独治疗显著提高了缺血心肌VEGF、PDGF-BB的表达水平,及磷酸化PI3K、Akt蛋白的表达水平。证实舒脉胶囊促毛细血管与微动脉新生的作用是通过促进VEGF、PDGF-BB、及磷酸化PI3K、Akt蛋白的表达实现的。 3.与舒脉胶囊单独治疗比较,PI3K抑制剂(LY294002)和舒脉胶囊联合治疗显著抑制PI3K/Akt信号通路的活性,同时明显抑制舒脉胶囊促VEGF、PDGF-BB的高表达,及降低舒脉胶囊促毛细血管与微动脉新生的作用。证实舒脉胶囊促血管新生的分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路介导VEGF、PDGF-BB的表达、促进VEGF、PDGF-BB介导的毛细血管以及稳定的侧支循环的建立。 第二部分舒脉胶囊改善心肌缺血大鼠左室重构的研究 背景 左室重构(left ventricular remodeling,LVR)是心脏功能由代偿向失代偿转变阶段所发生的心脏结构与形态的改变。左室重构不仅使心肌梗死患者左室功能严重受损,并发症增多,而且死亡率亦明显增加,因此抗心室重构已成为当前心血管领域中最为重要的研究内容之一。而心肌纤维化是左室重构发展的重要因素。 已经 血浆与心肌中致炎细胞因子与心肌纤维化和左室重构的病情发展密切相关。在AMI急性期存在炎症反应增强,早期即可发生心室重构,抗炎治疗可以减轻心室重构。肿瘤坏死因子-alpha(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)被认为是致炎细胞因子中最为重要的导致基质纤维化的细胞因子。TNF受体(TNFR)基因敲除小鼠与组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)的上调相关,并通过TIMP-1抑制胶原降解,促进纤维化的发展。TNF-α与CFs的增殖也有密切联系。因此抑制TNF-α的分泌对改善左室重构至关重要。 炎性刺激激活细胞内许多信号转导通路,包括核因子-κB信号通路和三个通过ERK、JNK、p38MAPK调控的信号通路。p38 MAPK被认为是调控炎症的重要信号通路。体内外研究证实在缺血与其它病理条件下,心肌内p38 MAPK被激活。激活的p38 MAPK促进心肌内分泌足够的TNF-α,从而促进心肌纤维化和心室重构。选择性的应用p38MAPK抑制剂SB203580可抑制p38 MAPK活性,降低TNFα的分泌,并且通过逆转MMPs和TIMP-1的表达比例,降低心肌纤维化,改善心室重构。由此可以推断p38 MAPK信号通路介导的TNFα的分泌是促进心肌纤维化和左室重构的潜在的信号调控机制。 此网站 有些中药已经被证实具有明显的抗炎疗效。但是,很少有中药复方对炎症因子介导的心肌纤维化和左室重构影响及其作用机制的研究。舒脉胶囊是根据中药组方原则合成的复方制剂,在临床已经多年被用于治疗缺血性心脏病。本研究通过观察心肌缺血大鼠缺血心肌组织学、形态学的病理改变及超微结构改变,通过实时定量RT-PCR,免疫组化检测缺血心肌心肌胶原Ⅰ(collagenⅠ)mRNA及蛋白的表达,免疫组化检测缺血心肌α-SMA蛋白的表达,通过Western blot检测缺血心肌p38 MAPK、TNF-α、及TIMP-1的蛋白表达,通过放免法检测血浆TNF-α的水平,并通过超声心动图检测大鼠整体与局部心功能,探讨舒脉胶囊抑制心肌缺血大鼠炎症因子TNFα介导的心肌成纤维细胞增殖、心肌纤维化和左室重构的疗效及信号调控机制。 目的 1.通过观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌组织学、形态学及超微结构的改变、整体与局部心功能、α-SMA蛋白表达、及collagenⅠmRNA与蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊减少心肌成纤维细胞增殖、降低心肌纤维化、及改善左室重构的疗效。 2.观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌磷酸化应激激活细胞丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、TNF-α、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊改善左室重构的机制。 时间 方法 1.研究对象 建立大鼠心肌梗死实验模型Wistar大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血模型。造模方法同第一部分。造模成功的大鼠随机分为舒脉大剂量组(SMCH)、舒脉小剂量组(SMCL)、p38MAPK抑制剂SB203580(SB)、模型组(MIR);另设假手术组(Sham)。每组24只,1、6周每个时间段各12只。 2.研究内容 (1)超声心动检测;(2)放射免疫法检测血浆TNF-α含量;(3)Western blot检测缺血心肌磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、TNF-α、TIMP-1蛋白表达;(4)实时定量RT-PCR检测缺血心肌collagenⅠmRNA表达;(5)免疫组化染色检测缺血心肌collagenⅠ、α-SMA蛋白表达;(6)HE染色;(7)天狼猩红染色检测胶原含量的变化;(8)透射电镜观测心肌超微结构变化。 结果 1.左心室整体与局部功能超声心动图分析…
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目的比较同期推量放射治疗(SIB)和全脑照射+三维适形放射治疗(WBRT+3DCRT)序贯治疗在肺癌脑转移患者中的应用效果。方法收

目的比较同期推量放射治疗(SIB)和全脑照射+三维适形放射治疗(WBRT+3DCRT)序贯治疗在肺癌脑转移患者中的应用效果。方法收集2006年1月至2011年4月间152例患者行SIB(研究组),146例肺癌脑转移瘤患者行WBRT+3D-CRT序贯治疗(对照组),比较两组患者的临床效果。结果研究组患者的客观缓解率、疾病控制率和1年生存率均高于对照组,差异均有统计学意义(均P