Monthly Archive: December 2016

Ox-LDL诱导BMSCs增殖和迁移,上调Akt2、MMP-2表达,下调Akt1、eNOS表达;LOX-1单抗或let-7g类似物

Ox-LDL诱导BMSCs增殖和迁移,上调Akt2、MMP-2表达,下调Akt1、eNOS表达;LOX-1单抗或let-7g类似物能抑制ox-LDL诱导的BMSCs增殖和迁移。 结论: 1、Ox-LDL能被小鼠BMSCs吞噬,诱导MSCs增殖和迁移,对MSCs凋亡无明显影响; 2. Ox-LDL诱导的小鼠BMSCs增殖和迁移与let-7g/LOX-1-Akt2信号通路相关 第一部分小鼠BMSCs体外扩增及ox-LDL对BMSCs凋亡的影响 目的:体外分离培养小鼠BMSCs,探讨ox-LDL对其凋亡的影响。 Selleck XL184 方法:采用密度梯度离心法+贴壁培养法分离扩增小鼠BMSCs,采用MTT方法测定MSCs的生长曲线,应用流式细胞仪测定细胞表面抗原表达,成脂诱导分化鉴定BMSCs分化能力。Annexin-V/PI及TUNEL检测ox-LDL对MSCs凋亡的影响。 结果:刚分离的小鼠骨髓细胞呈圆形,经多次换液、传代后去除悬浮细胞,可见MSCs贴壁生长,第三代细胞行流式细胞术检测表面抗原,显示CD29阳性,而CD31、CD34、CD45阴性,成脂分化示MSCs能分化为脂肪细胞。Annexin-V/PI细胞凋亡检测示不同浓度ox-LDL(0、10、20、40μg/mL)干预24h后MSCs凋亡率分别为2.0±0.9%、3.2±1.2%、3.9±1.8%、4.3±2.2%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);20μg/mL的ox-LDL干预0、6、12、24h后MSCs凋亡率分别为2.3±0.8%、3.4±1.2%、4.2±1.6%、3.9±1.4%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);TUNEL细胞凋亡检测示不同浓度ox-LDL(0.10、20、40μg/mL)干预24h后MSCs凋亡率分别为2.1±1.0%、2.9±1.2%、4.0±0.9%、3.7±1.3%,凋亡率差异无显著性(P>0.05);20μg/mL的ox-LDL干预0、6、12、24h后MSCs凋亡率分别为2.5±0.7%、3.7±1.3%、4.2±1.2%、4.0±1.0%,凋亡率差异无显著性(P>0.05)。 结论:本课题采用密度梯度离心法+贴壁培养法成功地分离和体外扩增出较为均一的BMSCs。短时间低至中浓度的ox-LDL对MSCs凋亡无明显影响。 第二部分Let-7g/LOX-1介导MSCs吞噬ox-LDL 目的:观察小鼠BMSCs对ox-LDL的吞噬及微小RNA let-7g和膜受体LOX-1在其中的作用。 方法:采用ELISA方法检测MSCs是否能吞噬ox-LDL,实时定量PCR和/或检测western blot检测ox-LDL干预后let-7g和LOX-1表达水平的变化;分别采用LOX-1特异性拮抗剂LOX-1单抗以及let-7g类似物预处理细胞,检测MSCs对ox-LDL吞噬作用的改变程度。 结果:20μg/mL ox-LDL干预MSCs24h后细胞内ox-LDL浓度显著升高,为无ox-LDL干预对照组的6.0±0.8倍,P