本研究首次证明舒脉胶囊对心肌缺血(MI)大鼠具有显著的促血管新生疗效,改善MI大鼠心功能。表现为微血管密度(小动脉、小静脉)的增加

本研究首次证明舒脉胶囊对心肌缺血(MI)大鼠具有显著的促血管新生疗效,改善MI大鼠心功能。表现为微血管密度(小动脉、小静脉)的增加,心功能指标LVEF的提高,LVESD、LVEDD降低。且舒脉胶囊的疗效具有剂量依赖性。证实了舒脉胶囊通过对缺血心肌促血管新生作用达到了改善心功能的终极目标。 2.与MIR组比较,舒脉胶囊单独治疗显著提高了缺血心肌VEGF、PDGF-BB的表达水平,及磷酸化PI3K、Akt蛋白的表达水平。证实舒脉胶囊促毛细血管与微动脉新生的作用是通过促进VEGF、PDGF-BB、及磷酸化PI3K、Akt蛋白的表达实现的。

3.与舒脉胶囊单独治疗比较,PI3K抑制剂(LY294002)和舒脉胶囊联合治疗显著抑制PI3K/Akt信号通路的活性,同时明显抑制舒脉胶囊促VEGF、PDGF-BB的高表达,及降低舒脉胶囊促毛细血管与微动脉新生的作用。证实舒脉胶囊促血管新生的分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路介导VEGF、PDGF-BB的表达、促进VEGF、PDGF-BB介导的毛细血管以及稳定的侧支循环的建立。 第二部分舒脉胶囊改善心肌缺血大鼠左室重构的研究 背景 左室重构(left ventricular remodeling,LVR)是心脏功能由代偿向失代偿转变阶段所发生的心脏结构与形态的改变。左室重构不仅使心肌梗死患者左室功能严重受损,并发症增多,而且死亡率亦明显增加,因此抗心室重构已成为当前心血管领域中最为重要的研究内容之一。而心肌纤维化是左室重构发展的重要因素。 已经 血浆与心肌中致炎细胞因子与心肌纤维化和左室重构的病情发展密切相关。在AMI急性期存在炎症反应增强,早期即可发生心室重构,抗炎治疗可以减轻心室重构。肿瘤坏死因子-alpha(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)被认为是致炎细胞因子中最为重要的导致基质纤维化的细胞因子。TNF受体(TNFR)基因敲除小鼠与组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)的上调相关,并通过TIMP-1抑制胶原降解,促进纤维化的发展。TNF-α与CFs的增殖也有密切联系。因此抑制TNF-α的分泌对改善左室重构至关重要。 炎性刺激激活细胞内许多信号转导通路,包括核因子-κB信号通路和三个通过ERK、JNK、p38MAPK调控的信号通路。p38 MAPK被认为是调控炎症的重要信号通路。体内外研究证实在缺血与其它病理条件下,心肌内p38 MAPK被激活。激活的p38 MAPK促进心肌内分泌足够的TNF-α,从而促进心肌纤维化和心室重构。选择性的应用p38MAPK抑制剂SB203580可抑制p38 MAPK活性,降低TNFα的分泌,并且通过逆转MMPs和TIMP-1的表达比例,降低心肌纤维化,改善心室重构。由此可以推断p38

MAPK信号通路介导的TNFα的分泌是促进心肌纤维化和左室重构的潜在的信号调控机制。 此网站 有些中药已经被证实具有明显的抗炎疗效。但是,很少有中药复方对炎症因子介导的心肌纤维化和左室重构影响及其作用机制的研究。舒脉胶囊是根据中药组方原则合成的复方制剂,在临床已经多年被用于治疗缺血性心脏病。本研究通过观察心肌缺血大鼠缺血心肌组织学、形态学的病理改变及超微结构改变,通过实时定量RT-PCR,免疫组化检测缺血心肌心肌胶原Ⅰ(collagenⅠ)mRNA及蛋白的表达,免疫组化检测缺血心肌α-SMA蛋白的表达,通过Western

blot检测缺血心肌p38 MAPK、TNF-α、及TIMP-1的蛋白表达,通过放免法检测血浆TNF-α的水平,并通过超声心动图检测大鼠整体与局部心功能,探讨舒脉胶囊抑制心肌缺血大鼠炎症因子TNFα介导的心肌成纤维细胞增殖、心肌纤维化和左室重构的疗效及信号调控机制。 目的 1.通过观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌组织学、形态学及超微结构的改变、整体与局部心功能、α-SMA蛋白表达、及collagenⅠmRNA与蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊减少心肌成纤维细胞增殖、降低心肌纤维化、及改善左室重构的疗效。 2.观察舒脉胶囊对实验性大鼠缺血心肌磷酸化应激激活细胞丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、TNF-α、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1蛋白表达的影响,探讨舒脉胶囊改善左室重构的机制。 时间 方法 1.研究对象 建立大鼠心肌梗死实验模型Wistar大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌缺血模型。造模方法同第一部分。造模成功的大鼠随机分为舒脉大剂量组(SMCH)、舒脉小剂量组(SMCL)、p38MAPK抑制剂SB203580(SB)、模型组(MIR);另设假手术组(Sham)。每组24只,1、6周每个时间段各12只。 2.研究内容 (1)超声心动检测;(2)放射免疫法检测血浆TNF-α含量;(3)Western blot检测缺血心肌磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、TNF-α、TIMP-1蛋白表达;(4)实时定量RT-PCR检测缺血心肌collagenⅠmRNA表达;(5)免疫组化染色检测缺血心肌collagenⅠ、α-SMA蛋白表达;(6)HE染色;(7)天狼猩红染色检测胶原含量的变化;(8)透射电镜观测心肌超微结构变化。 结果 1.左心室整体与局部功能超声心动图分析 在治疗后第1、6周时进行了超声检查。左室射血分数(LVEF)是目前临床上评价左心室整体功能最常用的指标。治疗第1周后,SMCH组、SMCL组、SB组的LVEF、BW较MIR组显著增高(P<0.05),而LVESD、LVEDD、LVW/BW较MIR组显著降低。局部室壁增厚率(WT)可用来反应心肌局部功能。治疗第1周后,SMCH组、SMCL组、SB组的WT较MIR组显著增高(P<0.05)。进一步组间两两比较发现,应用大剂量舒脉胶囊组(SMCH)较小剂量舒脉胶囊组(SMCL)或SB组WT无显著性差异(P>0.05)。 治疗第6周后,SMCH组、SMCL、SB组的LVEF、BW、WT较MIR组显著增高(P<0.05),LVESD、LVEDD、HW/BW较MIR组显著降低(P<0.05)。进一步两两比较分析,SMCH较SMCL组LVEF、WT增高,SMCH组LVESD、LVEDD、HW/BW较SMCL组降低(P<0.05)。SMCH组较SB组各指标差异差别无统计学意义(P>0.05)。 2.

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