KIf-4蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响:1)过表达Klf-4能够使骨肉瘤细胞阻滞在G0/G1期;2)过表达Klf-4能够增

KIf-4蛋白对骨肉瘤细胞周期和增殖能力的影响:1)过表达Klf-4能够使骨肉瘤细胞阻滞在G0/G1期;2)过表达Klf-4能够增加骨肉瘤细胞G0/G1期周期相关蛋白p21和p27的表达;3)Klf-4过表达可明显抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。4.Klf-4蛋白对骨肉瘤细胞化疗敏感性的影响:1)过表达Klf-4蛋白能够降低化疗药物(阿霉素ADR和顺铂CDDP)对骨肉瘤细胞的增殖抑制能力;2)过表达Klf-4能够抵抗化疗药物引起的凋亡诱导作用;3)沉默Klf-4能够增强骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性;4)Klf-4蛋白表达的高低并不影响多药耐药基因ABCB1和ABCC1的表达,沉默Klf-4能够选择性地降低耐药相关的肿瘤干细胞标记物ABCG2的转录水平。5.Klf-4蛋白对骨肉瘤细胞转移能力的影响:1)过表达Klf-4能够引起骨肉瘤细胞发生间质样变化;2)过表达Klf-4能够上调骨肉瘤细胞间质样蛋白标记物FN. Vinmetin的表达水平;3)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞划痕修复能力;4)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞的运动迁移能力;5)沉默Klf-4蛋白能够抑制骨肉瘤细胞的划痕修复能力及细胞迁移运动能力;6)过表达Klf-4能够引起骨肉瘤细胞肺转移相关标记物CXCR-4的mRNA和蛋白水平上调,沉默Klf-4能够降低CXCR-4的mRNA和蛋白水平。6.

没有 p38MAPK信号通路对Klf-4调控的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响:1)过表达Klf-4能够激活p38 MAPK信号通路;2)过表达Klf-4能够增强骨肉瘤细胞内p38的磷酸化水平,反之,沉默Klf-4则降低p-p38的表达水平;3)应用p38抑制剂或siRNA干扰p38蛋白表达,可减弱骨肉瘤细胞内Klf-4过表达所引起的sphere形成能力;4)p38抑制剂可以显著抑制Klf-4促进的骨肉瘤细胞转移能力。四.研究结论:Klf-4蛋白是维持骨肉瘤肿瘤干细胞特性所必须的,其表达水平与骨肉瘤的转移、耐药密切相关,而p38 MAPK信号通路则参与调控了Klf-4介导的骨肉瘤肿瘤干细胞特性。第三部分辛伐他汀通过抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性一.研究目的:第一、二部分的研究结果显示,阿霉素增强骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力作用是通过上调Klf-4蛋白实现的,进一步地我们发现Klf-4蛋白的表达具有维持和促进骨肉瘤肿瘤干细胞特性的作用,因此,寻找以Klf-4蛋白为作用靶点的药物或抑制剂,将有助于实现抑制骨肉瘤肿瘤干细胞特性和有效提高阿霉素的临床疗效。然而目前市场上并没有针对Klf-4的特异性抑制剂或药物,基于此,本课题旨在寻找可以抑制Klf-4蛋白的药物来拮抗阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力,为临床靶向治疗骨肉瘤提供新策略。二.研究方法:慢病毒转染细胞构建目的基因过表达模型,Western

Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达;流式细胞术检测干细胞标记物CD133的表达;肿瘤微球形成实验考察细胞的自我更新能力;细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力;裸小鼠移植瘤实验检测细胞成瘤能力;免疫组化检测肿瘤组织样本中的目标蛋白表达。三.研究结果1.他汀类药物可抑制Klf-4蛋白进而影响骨肉瘤sphere形成能力:1)多个他汀类药物均能浓度依赖性的降低Klf-4蛋白的表达,其中辛伐他汀的作用最强;2)他汀类药物可以明显减少过表达Klf-4所促进的骨肉瘤sphere形成能力。2.辛伐他汀可以拮抗ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性:1)辛伐他汀能够明显抑制ADR促进的干细胞标记物CD133表达比例;2)辛伐他汀能够显著减少ADR促进的肿瘤干细胞标记物CD133、ALDHA1和ABCG2的转录;3)辛伐他汀能够显著减少ADR促进的sphere形成数目增加。3.辛伐他汀可以拮抗ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力:1)辛伐他汀能够明显抑制ADR增强的骨肉瘤细胞划痕修复能力;2)辛伐他汀能够显著抑制ADR引起的骨肉瘤细胞迁移运动能力增强。4.辛伐他汀通过抑制Klf-4拮抗ADR所促进的骨肉瘤细胞成瘤性:1)较高细胞密度(10×104/只)接种时,ADR给药组与生理盐水组的成瘤率均为100%,但ADR给药组平均成瘤体积大于生理盐水组;ADR合用辛伐他汀给药组的成瘤率(50%)明显低于ADR给药组,且平均瘤体积小于ADR给药组;2)较低细胞密度(2×104/只)接种时,与生理盐水组10%的成瘤率相比,ADR给药组的成瘤率明显提高(70%),ADR合用辛伐他汀给药组的成瘤率则明显低于ADR给药组,仅为20%;3)ADR给药组的肿瘤样本中Klf-4的表达水平高于生理盐水组,ADR合用辛伐他汀给药组的Klf-4表达水平则明显低于ADR给药组;4)ADR给药组的肿瘤样本中Klf-4和CD133的荧光表达水平高于生理盐水组,ADR合用辛伐他汀给药组的Klf-4和CD133的荧光表达水平则明显低于ADR给药组。四.研究结论:本研究发现了以辛伐他汀为代表的他汀类药物可以通过抑制Klf-4蛋白表达而有效地拮抗了阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力,提示临床阿霉素用药联合辛伐他汀为代表的他汀类药物可以更加有效地发挥抗骨肉瘤作用。
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的的主要疾病之一,全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症。目前,大多数的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效,但仍然存在着副作用大、价格昂贵等诸多劣势。因此,寻找新型、高效、低毒的抗肿瘤药物是我们面临的巨大挑战。我国的传统医学在治疗肿瘤方面有着悠久的历史,中草药中含有多种具有很强抗肿瘤作用的植物单体,如何将其分离提取出来并进行合理的开发利用,成为了世界医学面临的重要课题。现代药理学研究证明,中药牛蒡子具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。其主要有效成分牛蒡苷(Arctiin,ARC)在人体内生物利用度低,需经肠道微生物酶解转化为牛蒡苷元(Arctigenin,ARG)方能吸收入血液,发挥药效。目前,药学研究用ARG多为实验室自制,其制备方法都或多或少存在着一些不足之处,如提取效率低、步骤繁杂、对实验室设备要求高等。本研究采用微生物发酵法和硅胶柱层析法从牛蒡子粉中分离纯化ARG,成功建立了一种简便高效的提取方法。此外,据相关报道,ARG可以抑制多种恶性肿瘤细胞的生长,但对于其抗肿瘤作用的分子机制却知之甚少。本研究选取人肝细胞癌作为研究对象,对ARG体内外抗肿瘤机制进行了深入探讨。ARG的制备:本研究采用微生物发酵法,筛选出泡盛曲霉变种和里氏木霉作为发酵菌种,利用两株霉菌所产生的生物酶对牛蒡子粉进行炮制,将牛蒡子粉中的牛蒡苷转化为牛蒡苷元。并且通过对发酵过程中碳源、氮源、发酵时间、p

寻找更多 可能 H、装液量、接种量、发酵底物固液比、碳氮比等诸多因素进行优化,制定出一套牛蒡子粉最佳发酵工艺,可使牛蒡苷转化率达97.8%,产物溶出率达95.7%,损失率低至4.

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