巨噬细胞相对增殖率和细胞因子TNF-α与IL-6的分泌随巨噬细胞培养时间的延长而有增加趋势,但不同干预时间增加趋势略有不同。提示可

巨噬细胞相对增殖率和细胞因子TNF-α与IL-6的分泌随巨噬细胞培养时间的延长而有增加趋势,但不同干预时间增加趋势略有不同。提示可能原因如下:①培养基消耗致营养缺乏导致巨噬细胞RAW264.7大量分泌细胞因子,②炎症细胞因子对巨噬细胞RAW264.7自噬作用。③浒苔多糖的作用。 4.浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7mTOR基因表达,与其促进巨噬细胞RAW264.7增殖和促进免疫活化有一致效应,提示P13K/AKT-PTEN-mTOR信号转导通路可能与巨噬细胞RAW264.7免疫调节有关联。
喹赛多作为喹嗯啉类药物的新品种,具有良好的抗菌促生长作用,并且具有毒副作用小、安全性高、用药后吸收快、消除迅速、残留期短、无积蓄作用等优点。实验室运用DDRT技术,从喹赛多作用下猪肝组织中筛选出7条差异表达的基因,分别是类胰岛素样生长因子-1(Insulin-like Growth Factor-1,

IGF-1)、表皮生长因子(Epidermal Growth Factor, EGF)、ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymeras, PARP)、抗细胞凋亡因子1(The Defender Against Apoptotic Death1, DAD1)、补体C3(Complement Component3, C3)、转酮醇酶(transketolase, TK)和新基因。其中DAD1在阻止细胞凋亡中起作用;而C3补体能通过免疫系统的激活来发挥抗菌抗炎作用,以增加机体免疫力;转酮醇酶在磷酸戊糖途径发挥着关键作用,调节葡萄糖代谢,并以此影响着细胞的增殖等生命活动;EGF、IGF-1属于生长因子类,对于生长具有重要的作用,PARP与DNA的损伤修复有关。因此喹赛多的抗菌促生长作用可能与这7个基因的表达密切相关。由于信号通路是调节基因表达的一种重要方式,喹赛多是通过哪些信号通路来调控这7个基因,在调控这7个基因的信号通路中,主要的信号通路与喹赛多的药物作用有怎样的联系,是本论文所要解决的问题。 寻找更多 1.PK-15细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路 实验运用RT-qPCR技术,采用相对定量方法,用喹赛多(2lμM)作用于PK-15细胞分别作用0.5h-8h后对7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定。结果表明在PK-15细胞系中,喹赛多(2μM)作用之后,DAD1、TK、PARP、EGF、C3、新基因6个基因的mRNA表达水平在1h显著升高,IGF-1mRNA表达水平在喹赛多作用2h显著升高。运用RT-qPCR、Western Blot等技术,对PK-15细胞中喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明,PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase)、 NF-KB(Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer)信号通路对IGF-1的表达起主要作用,Erkl/2(extracellular signal-regulated kinasel/2)、JNK(c-Jun BI 2536细胞系 N-terminal kinase)、Jak2(Janus kinase)信号通路对IGF-1的表达可能起辅助作用;对于TK的表达,NF-κB信号通路对其表达起主要作用,Erk1/2、JAK2、PI3K、TGF-β(transforming

growth factor)对其表达可能起辅助作用;PI3K、TGF-β、NF-κB信号通路对补体C3的表达起主要作用,Erk1/2起辅助作用;PI3K、NF-κB信号通路对PARP表达起主要作用,TGF-β、Erk1/2对PARP表达起辅助作用;对于DAD1的表达,研究表明,PI3K信号通路对其表达起主要作用,NF-κB、JAK2、TGF-β对其表达可能起辅助作用;PI3K、NF-KB信号通路对EGF表达起主要作用,TGF-β信号通路对EGF表达起辅助作用;PI3K、Erk1/2、NF-κB信号通路对新基因的表达起主要作用。总体来说,在PK-15细胞系中,喹赛多主要通过PI3K和NF-κB信号通路来调控其作用相关7个基因的表达。

2.猪原代肝细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路 实验运用RT-qPCR技术等技术,对喹赛多孵育猪原代肝细胞7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定,发现在猪原代肝细胞中,喹赛多孵育细胞0.5h后,新基因、DAD1mRNA表达水平显著升高,EGF mRNA表达水平升高且差异极显著;在1h时,IGF-1、TK、PARP mRNA表达水平升高且差异极显著;2h时,C3mRNA表达水平升高且差异极显著。运用RT-qPCR技术,对猪原代肝细胞喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明,在猪原代肝细胞中,PI3K是调节EGF的主要信号通路。JNK、PI3K是调节IGF-1的主要信号通路。喹赛多主要通过TGF-β信号通路来调节C3表达。喹赛多主要通过TGF-β、PI3K信号通路来调节DAD1表达。喹赛多主要通过TGF-β、P38、PI3K等信号通路来调节PARP表达。喹赛多主要通过ERK1/2、P38、TGF-β、JNK、PI3K等信号通路调节TK表达。对于新基因而言,其表达受多条信号通路的调节,其中最主要的是P38、TGF-β、JNK和P13K信号通路。 MK-2206半抑制浓度 综上所述,本研究首次对PK-15细胞系和猪原代肝细胞中喹赛多作用相关7个基因的时效关系进行测定,首次对PK-15细胞系和猪原代肝细胞中喹赛多对其作用相关7个基因的信号通路调控机制进行研究。研究表明,喹赛多在PK-15和猪原代肝细胞中的作用方式有相同,也有不同。相同点是在两个细胞中,喹赛多调节其作用相关7个基因的主要信号通路是相同的,都有PI3K这条与生长密切相关的信号通路。不同点:1,喹赛多诱导其作用相关7个基因表达的时效关系不同。2,喹赛多调节其作用相关7个基因表达的主要信号通路不同,在PK-15细胞上,NF-κB信号通路起主要作用,而在猪原代肝细胞中,NF-κB几乎没有作用。3,在两个细胞中,对新基因表达有调节作用的信号通路不同。由此推测,喹赛多主要是通过PI3K信号通路来调节其作用相关基因的表达,从而发挥药物作用。
目的: 1.研究mTOR新型靶向治疗药物依维莫司对未分选细胞和干细胞的差异作用,了解乳腺癌干细胞对依维莫司体内、体外药物敏感性。 2.将靶向治疗药物依维莫司及化疗药物多西紫杉醇联合使用,了解乳腺癌干细胞对mTOR靶向治疗和常规化疗药物联合使用的药物敏感性。 3.在体内体外实验中联合应用依维莫司及曲妥珠单抗,以研究HER2阳性乳腺癌干细胞对mTOR和HER2靶点药物联合应用的敏感性。 4.联合使用依维莫司及内分泌治疗药物来曲唑,了解芳香化酶高表达的乳腺癌干细胞对mTOR靶向治疗和常规内分泌治疗药物联合使用的药物敏感性。 方法: 1.

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