01),提示染铅组大鼠体内~(45)Ca~(2+)摄入远低于对照组。各组大鼠骨钙含量比较结果为:对照组>高钙铅处理组>铅处理组>低

01),提示染铅组大鼠体内~(45)Ca~(2+)摄入远低于对照组。各组大鼠骨钙含量比较结果为:对照组>高钙铅处理组>铅处理组>低钙铅处理组,而大鼠骨骼中铅含量结果则与之相反,雌雄均呈类似趋势。铅处理组和低钙铅处理组雄性大鼠骨铅水平相近,其余组间骨钙和骨铅差异显著(p<0.05),统计分析发现二者呈直线负相关。激光共聚焦扫描电镜观察Fluo-3/AM分子探针标记的成骨细胞内Ca~(2+)荧光时发现,胞内游离Ca~(2+)浓度在铅作用下升高。证实铅对体内外钙的吸收均有着显著的抑制作用。 为什么 5.大鼠血液OC值在对照组中最大,其次为高钙铅处理组,铅处理组列第三,均高于低钙铅处理组,组间差异明显。雌雄类似,但雄性中尤其明显。与之相反的是,大鼠血液PTH含量则表现为低钙铅处理组中最高,其次为铅处理组、高钙铅处理组和对照组。除雄性大鼠铅处理和高钙铅处理组外,其余大鼠各组间PTH含量差异极显著。统计分析结果显示,大鼠OC和PTH之间并不存在直线负相关;但作散点图分析发现,OC和PTH之间存在负相关的趋势。PTHr1在低钙铅处理组中高表达,而在对照组中低表达,高钙铅处理组表达量高于对照组但低于铅处理组。OC的表达趋势与PTHr1相反,对照组和高钙铅处理组中OC高表达,低钙铅处理组中表达量极少,铅处理组表达则稍多于低钙铅处理组。结果表明铅影响了大鼠体内骨相关蛋白及其受体的表达。 6.大鼠股骨OB及UMR106细胞电镜超微结构显示,铅使两类细胞结构不同程度改变,尤其是线粒体和粗面型内质网的结构变化较大,但对于细胞膜系统的损伤则仅在高浓度时出现。结果表明铅损伤了成骨细胞的结构。

7.铅使UMR106细胞贴壁性下降,OB的形态发生改变。OB和UMR106细胞ALP、CollagenⅠ随铅浓度的增加而表达减少,提示铅影响了成骨细胞的形态及标志物的表达;铅降低了成骨细胞OC的分泌,并使OC的调节因子如bFGF、cbfa1/osf2、c-fos和c-jun的表达减少;铅明显促进p-ERK1/2的表达,ERK1/2途径的特异性阻断剂PD98059可使铅对UMR106的这种作用减弱或消失,但对于总ERK1/2的表达并无影响。表明MAPK(ERK1/2)信号转导转导途径可能参与了铅对成骨细胞毒性作用的调控。 Lonafarnib体外 综上所述,铅抑制了骨骼的正常生长发育,低钙处理加剧了其作用,而适量的钙补充有利于减轻铅对于骨骼生长的抑制作用。铅对于骨骼生长发育的毒性与铅干扰机体钙的吸收和利用,以及与铅对OC表达的直接或间接影响相关,其中可能有ERK1/2信号转导途径的参与。
原发性支气管肺癌(简称肺癌),是最常见的肺部原发性恶性肿瘤。世界上至少有35个国家的男性肺癌在各种癌症死因中占第一位,女性中死于肺癌的患者也仅次于乳腺癌的死亡人数。研究表明组蛋白的乙酰化状态对参与细胞增殖和分化的基因表达具有重要调控作用,因此,基于组蛋白乙酰化的治疗策略逐渐引起重视。本文主要研究了组蛋白去乙酰基酶(histone

deacetylases,HDAC)抑制剂(histone deacetylases inhibitor,HDACI)TSA(Trichostatin A)对肺腺癌细胞A549的生命活动包括细胞周期及凋亡的影响,并且对特异Ⅱ型肺细胞标志——muc1基因和细胞周期调节因子cdc2基因启动子区的染色质重塑机制以及转录相关因子的结合进行了研究,为非小细胞肺癌的临床治疗提供一定的理论依据。 一、TSA对肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡的影响 1.TSA对肺腺癌细胞A549的细胞周期的影响 400nM TSA处理A549后,进行流式细胞仪检测结果显示:TSA可以引起A549细胞周期在G1期和G2/M期产生阻滞,以G2/M期阻滞更为显著。同时发现TSA也抑制G2/M期细胞周期相关因子cdc2,cdc25c以及cyclinB2的mRNA的表达,促进G1期细胞周期相关因子p21 mRNA的表达。 2.TSA对肺腺癌细胞A549凋亡的影响 流式细胞仪检测结果显示400nM TSA处理16小时起A549细胞开始出现凋亡,随着TSA处理时间的延长,凋亡程度逐渐加重;同时western blotting结果显示400nM TSA处理16小时起,PARP开始出现断裂,随着时间的延长PARP断裂程度逐渐加重。 二、TSA与p53对muc1基因及cdc2基因启动子活性的影响 1.TSA对muc1基因及cdc2基因启动子活性的影响:构建带有人2.4kb的muc1基因上游调控区序列以及cdc2基因启动子区的-758/+61的CAT报告基因质粒pREP4m-muc1-2.4k与pREP4m-cdc2-CAT。将含有报告基因表达质粒pREP4m-muc1-2.4k和pREP4m-cdc2-CAT以及内参照质粒pM-CAT瞬时共转染A549细胞之后加入TSA进行诱导处理,启动子活性分析结果表明:TSA可以抑制muc1和cdc2基因的启动子活性。将muc1基因上游调控区进行删切,构建不同长度(4k、1.6k、298bp、724bp)启动子序列驱动的报告基因质粒,启动子活性分析结果表明:TSA对muc1基因转录活性的抑制可能通过muc1基因启动子区-724上游的调控区介导。

寻找更多 2.p53对muc1基因及cdc2基因启动子活性的影响:p53表达质粒与pREP4m-muc1-2.4k和pREP4m-cdc2-CAT以及pM-CAT瞬时共转染A549细胞,启动子活性分析结果表明,p53可以降低muc1基因和cdc2的启动子活性,突变的p53表达质粒可以减弱这种抑制作用,TSA处理可以加强p53对muc1基因的抑制,同时western blotting结果显示TSA处理可以促进p53的表达,提示TSA可能通过p53间接调节muc1基因的表达。将muc1基因上游调控区的两个CCAAT盒以及一个潜在的p53半位点分别进行突变后与pM-CAT瞬时共转染A549细胞,启动子活性分析结果显示,潜在的p53半位点突变后p53抑制muc1基因启动子区活性的作用急剧减弱。这些结果提示,p53可能通过p53结合位点发挥对muc1基因的调节作用。 三、TSA对染色质重塑蛋白及修饰因子对muc1基因启动子活性的影响 1.PCAF与p300对muc1基因启动子活性的影响:PCAF表达质粒或p300表达质粒与pREP4m-muc1-2.4k和pM-CAT瞬时共转染A549细胞,启动子活性分析结果表明,PCAF和p300可以增强muc1基因启动子的活性。 2.BRG1与BRM对muc1基因启动子活性的影响:BRG1表达质粒(或其显性负突变体)与pREP4m-muc1-2.4k和pM-CAT瞬时共转染A549细胞后,启动子活性分析结果表明,BRG1表达质粒抑制muc1基因启动子的活性;BRM表达质粒(或其显性负突变体)与pREP4m-muc1-2.

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