4 Western blot实验表明,在对照siRNA转染的细胞中,PS-341诱导TNFRSF10B上调,CASP8、CASP

4. Western blot实验表明,在对照siRNA转染的细胞中,PS-341诱导TNFRSF10B上调,CASP8、CASP9、CASP3活化和PARP1失活,但在ATF3 siRNA转染的细胞中这些现象受到明显抑制;SRB实验显示抑制ATF3增强了肿瘤细胞的存活:流式细胞术分析细胞凋亡发现PS-341诱导的对照siRNA转染哪里的细胞凋亡率为41%,ATF3 siRNA转染的凋亡细胞只有26%。5.在H460、A549、H157细胞中,敲低ATF4表达抑制PS-341诱导的TNFRSF10B上调和CASP级联反应,同时PS-341诱导的细胞凋亡百分比从29%降低到19%。6.在H460、A549、H157细胞中,抑制ATF4表达降也许低了PS-341诱导的ATF3和DDIT3上调;在H157和Calu-1细胞中,抑制ATF3表达,PS-341诱导的DDIT3上调受到轻微抑制,但ATF4表达不变;另一方面,敲低DDIT3表达,ATF3表达轻微降低,ATF4表达仍没有变化。利用蛋白质免疫共沉淀技术进一步研究ATF3和DDIT3之间的关系,发AC220 花费现DDIT3与ATF3相互结合形成复合物。7.当PS-341作用于细胞时,MAPK1和RPS6KA3的磷酸化水平明显升高,并呈剂量和时间依赖性。在多种细胞中,用MRK特异抑制剂U0126抑制MAPK1和RPS6KA3活化,发现PS-341诱导的TNFRSF10B上调受到显著抑制。8. Western blot实验发现PS-341诱导PKCδ切割活化,产生41kD片段,并呈剂量和时间依赖性。

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